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Takara Cas9核酸酶，一款功能強大的基因編輯工具酶！
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CRISPR/Cas9基因編輯包括兩大組件：“向導”sgRNA和“剪刀”Cas9核酸酶，二者共同作用，結合形成切割復合體，能夠靶向地對外源基因進(jìn)行敲除、插入、定點(diǎn)突變等編輯，使得定點(diǎn)基因組改變的難度明顯降低，可進(jìn)行操作的目標生物種類(lèi)大大增加。
在基因編輯實(shí)驗中，如何將sgRNA和Cas9蛋白質(zhì)導入細胞是十分重要的環(huán)節，選擇到合適的方法或體系可以大大提高基因編輯的成功率。
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目前基因編輯技術(shù)較為成熟，針對不同的細胞，更是開(kāi)發(fā)出了多種導入體系，較為成熟完善的傳統體系有質(zhì)粒載體導入、病毒載體導入，比較新穎且有特色的體系有納米囊泡系統導入以及RNP復合物的直接導入。在實(shí)驗條件允許的情況下，相對于其他導入方式，RNP復合物的直接導入更加突出了以下幾點(diǎn)優(yōu)勢：
1、不使用Cas9基因，從而有效抑制由于基因殘留使Cas9持續表達造成的脫靶現象
2、不存在由于蛋白質(zhì)轉錄、翻譯表達所引起的時(shí)間滯后，可實(shí)現快速有效的突變導入
3、不需要考慮每個(gè)靶向生物的啟動(dòng)子和密碼子
4、可以控制導入的Cas9蛋白質(zhì)的量
而Cas9核酸酶作為RNP復合物重要組成部分，選擇并使用一款優(yōu)質(zhì)的Cas9核酸酶就變得異常重要。Takara有來(lái)源于野生型釀膿鏈球菌的重組Cas9蛋白質(zhì)，助力基因編輯，錨定靶點(diǎn)切割！Guide-it Recombinant Cas9蛋白質(zhì)含量較高，可滿(mǎn)足電穿孔、顯微注射等多種不同復合物導入方式，C末端的NLS核定位信號可以實(shí)現快速有效的突變導入，且經(jīng)過(guò)不斷的產(chǎn)品優(yōu)化已證實(shí)對哺乳動(dòng)物細胞具有良好的耐受性，可降低導入哺乳動(dòng)物細胞時(shí)所造成的細胞損傷，使脫靶效應最小化的同時(shí)，更容易實(shí)現高效率的基因編輯。
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更穩定！更高效！
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1.不同公司Cas9產(chǎn)品在hiPS細胞中基因敲除效率比較
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實(shí)驗案例：Cellartis hiPSC-18細胞系中的基因敲除
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數據來(lái)源于Takara Bio USA, Inc.
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通過(guò)剪切后的條帶強度可以對編輯細胞所占的百分比進(jìn)行半定量估計。凝膠底部的每個(gè)數字代表所示RNP的基因編輯效率（以百分比表示）。結果顯示，與其他品牌推薦的制備向導RNA的方法相比，Guide-it Recombinant Cas9與Guide-it In Vitro Transcription Kit制備的sgRNA結合使用，可以為許多靶點(diǎn)提供一致且有效的基因編輯。
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更廣泛！更普適！
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2.不同細胞系人誘導多能干細胞（hiPSC）中基因敲除效率比較
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實(shí)驗案例：多系人誘導多能干細胞（hiPSC）CD81基因敲除
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在本實(shí)驗中，將Cas9-sgRNA RNP復合物通過(guò)電穿孔方式導入至hiPSC-18 和hiPSC-22兩種誘導多能干細胞中敲除CD81基因。CD81抗體染色后，流式細胞術(shù)檢測結果顯示，電穿孔10天后hiPSC-18的敲除效率為91％，hiPSC-22的敲除效率為85％，顯示出非常高的基因編輯效率。
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更多應用場(chǎng)景！
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3.Guide-it Recombinant Cas9用于基因敲入實(shí)驗
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實(shí)驗案例：AAVS1和CXCR4基因同源定向修復
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Panel A. 這些圖表展示了CD34+造血干細胞的HDR實(shí)驗是如何完成的。將含有Hind III酶切位點(diǎn)的ssDNA模板插入AAVS1基因中，將同時(shí)含有Hind III和BamH I酶切位點(diǎn)的模板插入CXCR4基因中。每側同源臂長(cháng)度為90 bp。
Panel B. 將修復模板和Cas9/sgRNA RNPs通過(guò)電穿孔導入后，用PCR擴增靶細胞中各目標基因，并進(jìn)行酶切分析。編輯效率顯示在凝膠上每個(gè)陽(yáng)性孔上面。CXCR4基因經(jīng)過(guò)BamH I酶切后顯示出一條額外條帶，原因是基因編輯前野生型基因中已經(jīng)存在一個(gè)BamH I位點(diǎn)了?；蚓庉?天后，我們證實(shí)98%的造血干細胞CD34+染色陽(yáng)性。
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更多生產(chǎn)標準級別！
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4.GMP級別Cas9核酸酶效率驗證
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為了滿(mǎn)足更多臨床研究試驗的需求，Takara提供批次差異更低的產(chǎn)品，面向需要更高產(chǎn)品品質(zhì)的用戶(hù)，我們也同時(shí)提供Recombinant Cas9 Protein GMP grade，即GMP級別的Cas9核酸酶，制造過(guò)程中不使用人源或動(dòng)物源成分，已通過(guò)日本藥品與食品安全局（PFSB）的GMP級別標準生產(chǎn)測試，得到生產(chǎn)許可，并在該標準下進(jìn)行制造和品質(zhì)管理，適用于體外細胞工程和基因治療研究。
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以敲除293T細胞CD81基因為例，對Guide-it Recombinant Cas9（632641）和Recombinant Cas9 Protein GMP grade（T230）進(jìn)行基因組組編輯性能對比，結果證實(shí)T230具有與632641/632640相同的基因組編輯效率。
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關(guān)聯(lián)產(chǎn)品推薦
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sgRNA的體外轉錄和篩選系統
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可以被用來(lái)合成和檢測sgRNAs效率。該試劑盒包含了體外轉錄和純化sgRNAs，以及檢測重組Cas9核酸酶對PCR靶向片段剪切效率，可用于CRISPR/Cas9 研究中sgRNA的制備、純化和評價(jià)。
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· 通過(guò)體外轉錄有效制備用于CRISPR/Cas9基因編輯高品質(zhì)sgRNA的簡(jiǎn)便試劑盒
· 所制備sgRNA可用于體外剪切活性確認實(shí)驗和突變導入實(shí)驗
· sgRNA的產(chǎn)量、簡(jiǎn)便性及性?xún)r(jià)比進(jìn)一步優(yōu)化提升
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Takara Guide-it?產(chǎn)品線(xiàn)長(cháng)期致力于基因編輯實(shí)驗的解決方案！更多基因編輯相關(guān)資料歡迎您點(diǎn)擊下載CRISPR/Cas9基因編輯完整解決方案宣傳冊，或直接觀(guān)看在線(xiàn)講座視頻CRISPR/Cas9基因編輯全套操作和解決方案。
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