高安全性、高效價(jià)的慢病毒包裝方案新選擇
2022-08-12文章來(lái)源：takarabiomed
新品┃高安全性、高效價(jià)的慢病毒包裝方案新選擇
慢病毒是一種可用于在包含原代細胞、干細胞、神經(jīng)細胞等非分裂細胞在內的哺乳動(dòng)物細胞中進(jìn)行基因導入的多用途工具。
Takara推出的新品LVpro? Packaging Mix with pLVpro系列載體可以幫助你獲得高安全性、高效價(jià)的慢病毒。
■產(chǎn)品介紹
LVpro Packaging Mix是經(jīng)過(guò)優(yōu)化的質(zhì)?；旌衔?，高效表達慢病毒制備所需要的成分，可包裝生產(chǎn)高滴度重組慢病毒。 pLVpro vector是tat非依賴(lài)性第三代慢病毒載體，其中5’LTR的U3區域被CMV啟動(dòng)子取代，并且在不影響感染滴度的情況下刪除了包裝信號附近的HIV來(lái)源序列。 將pLVpro vector和LVpro Packaging Mix共轉染Lenti-X 293T細胞，包裝質(zhì)粒瞬時(shí)表達Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白，這有助于將重組病毒RNA（從pLVpro慢病毒載體轉錄而來(lái)）包入完整的病毒粒子中。使用這種經(jīng)過(guò)優(yōu)化的包裝質(zhì)?；旌衔锖透咝мD染Lenti-X 293T細胞的轉染試劑Trans IT-Virus-GEN（Mirus Bio, Code No. MIR 6700）或Trans IT-293（Mirus Bio, Code No. MIR 2700），可以獲得高滴度的重組慢病毒，而且在多數情況下，該病毒可用于直接感染靶細胞，而不需要事先進(jìn)行濃縮處理。
■產(chǎn)品特點(diǎn)
·HIV-1 tat非依賴(lài)性第三代慢病毒載體
·臨床使用可能，將HIV-1來(lái)源序列排除到極限，提高安全性
·優(yōu)化了包裝系統，制備高滴度慢病毒粒子
·和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector組合使用可進(jìn)行P2實(shí)驗（注：取決于插入基因）
■實(shí)驗例1LVpro Packaging Mix和其他品牌同類(lèi)試劑盒制備的慢病毒滴度比較
將表達ZsGreen1的慢病毒載體和包裝質(zhì)粒共轉染Lenti-X 293T細胞制備重組慢病毒，使用HT-1080細胞評估其生物學(xué)效價(jià)。與全部使用A公司產(chǎn)品的場(chǎng)合【1】相比，部分使用Takara產(chǎn)品的場(chǎng)合【2、3】得到的慢病毒滴度要高出10倍。另外，在全部使用Takara產(chǎn)品的場(chǎng)合【4】得到慢病毒滴度是
最高的。
■實(shí)驗例2兩種慢病毒基因導入方法比較：RBV-Spin法 vs Polybrene法
使用LVpro Packaging Mix制備表達ZsGreen1的慢病毒并進(jìn)行30倍稀釋?zhuān)缓蠓謩e通過(guò)RetroNectin（Code No. T100A）的RBV（RetroNectin Bound Virus）-Spin法或Polybrene法對人外周血單核細胞（PBMC）進(jìn)行基因導入，比較這兩種方法的轉導效率。
感染3天后回收細胞，測定ZsGreen1陽(yáng)性細胞率。結果顯示，Polybrene法的陽(yáng)性率為10%左右，而RBV-Spin法的陽(yáng)性率在20%以上，與Polybrene法相比顯示出較高的陽(yáng)性率。
■產(chǎn)品列表
