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Capturem? Trypsin/固定化胰蛋白酶（Trypsin）

2018-07-05文章來(lái)源：takarabiomed
Capturem? Trypsin
品牌 Code No. 包裝量 價(jià)格 說(shuō)明書(shū) 數量
Clontech 635722 20 rxns 3,155 元
 
■ 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析前的樣品消化步驟，通常需要4個(gè)小時(shí)甚至過(guò)夜，如果使用Capturem? Trypsin 或 Capturem? Pepsin，可在室溫下快速，高效和完全的消化蛋白質(zhì)，從而使蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程更加連貫。這兩款產(chǎn)品是一次性小型離心柱的形式，應用新型膜技術(shù)，膜上固定有胰蛋白酶（Trypsin）或胃蛋白酶（Pepsin），在短短幾分鐘內即可高效、完全地酶解蛋白質(zhì)樣品，與傳統的溶液法過(guò)夜處理相比，時(shí)間更短、效率更高、重復性更好、胰蛋白酶自溶片段更少，避免發(fā)生過(guò)度消化。
 
■ 快速、簡(jiǎn)單的操作流程
Capturem? Trypsin 和 Capturem? Pepsin包含小型離心柱和活化buffer，操作流程簡(jiǎn)單、快速，只需要加入200 μl活化buffer離心1 min，然后加入蛋白質(zhì)樣品再離心1 min，即可洗脫獲得可用于下游分析的肽段。
 
 
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
·操作快速，2 min-3 min內即可酶解蛋白質(zhì)樣品，無(wú)需過(guò)夜處理
·比溶液法效率更高，酶解更徹底
·樣品中自溶片段更少，蛋白質(zhì)非特異性修飾幾率更低
·可以使整個(gè)蛋白質(zhì)組學(xué)分析流程更加連貫，實(shí)現更有效的肽和蛋白質(zhì)的質(zhì)譜鑒定
 
■ 應用
·蛋白質(zhì)鑒定
·蛋白質(zhì)組學(xué)分析
·質(zhì)譜樣品制備
·抗體鑒定
 
■ 實(shí)驗例
 
使用本制品對BT474全細胞裂解液進(jìn)行酶解消化并做蛋白質(zhì)組學(xué)分析。通過(guò)RP-HPLC將裂解液分成19個(gè)獨立的組分（圖A），然后再使用本制品對每個(gè)組分單獨酶解，并使用LC/MS-MS分析，每個(gè)組分中帶有2個(gè)或以上的特異性肽段的蛋白質(zhì)總數被鑒定并繪制出，如B圖所示。
 
使用本制品可以實(shí)現快速完全的Apomyoglobin（Apo）酶解。上圖為使用RP-HPLC分析本制品和常規溶液法酶解蛋白質(zhì)的結果，圖A為未酶解的完整蛋白質(zhì)，圖B為溶液法室溫酶解16 h的蛋白質(zhì)，圖C為使用本制品酶解1 min的蛋白質(zhì)，結果顯示使用本制品酶解的非常徹底。
 
使用本制品可以酶解緊密折疊的蛋白質(zhì)Myoglobin (Myo)。使用RP-HPLC對本制品和常規溶液法酶解的產(chǎn)物進(jìn)行分析，圖A為未酶解的完整蛋白質(zhì)，圖B為溶液法室溫酶解16 h的蛋白質(zhì)，圖C為使用本制品酶解1 min的蛋白質(zhì)，結果顯示使用本制品可以快速有效地酶解緊密折疊的蛋白質(zhì)。
 
Capturem? Pepsin的操作流程。在酶消化之前，抗體樣品被變性和還原。使用附帶的活化buffer初次活化柱子后，將還原處理后的抗體樣品溶液（50-800 μl）加入離心柱中，離心1分鐘。 在這個(gè)過(guò)程中，柱上發(fā)生胃蛋白酶消化，隨后再一次離心洗脫即可獲得肽片段，加入NaOH中和洗脫的肽片段，即可用于下游分析。
 
使用Capturem? Pepsin消化不同的小鼠抗體同種型。小鼠的IgG1, IgG2a, IgG2b, 和 IgG3各取
100 μg，使用TCEP和醋酸于75℃處理15 min進(jìn)行變性操作，然后用5%甲酸buffer稀釋。使用Capturem? Pepsin對稀釋的樣品進(jìn)行消化，通過(guò)SDS-PAGE對消化和未消化的樣品（各取4 μg）進(jìn)行檢測，如上圖所示。
 
不同批次的Capturem? Pepsin消化產(chǎn)物HPLC圖譜比較。使用5%的甲酸稀釋50 μg的Apo，選擇3個(gè)不同批次的Capturem? Pepsin對其進(jìn)行消化，HPLC結果顯示三組消化產(chǎn)物具有相同的片段，說(shuō)明Capturem? Pepsin具有良好的重復性。
 
Capturem? Pepsin與pepsin溶液法消化結果比較。對50 μg 的anti-HER2單克隆抗體使用3種方法進(jìn)行消化，分別是Capturem? Pepsin，pepsin溶液法孵育4小時(shí)，pepsin溶液法孵育過(guò)夜。然后進(jìn)行質(zhì)譜分析。由上圖可以看出，使用溶液法的消化產(chǎn)物峰左移并且總體峰的數量較多，說(shuō)明產(chǎn)生了過(guò)度消化，而使用Capturem? Pepsin則沒(méi)有這個(gè)問(wèn)題。
 
 
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http://www.clontech.com/CN/Products/Protein_Expression_and_Purification/Reagents/
Capturem_Trypsin_Pepsin?sitex=10022:22372:US