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■ 制品說(shuō)明
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酵母雙雜交載體
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pGBKT7是酵母雙雜交bait表達載體，旨在表達GAL4 DNA結合結構域（DNA-BD, 1-147 aa）與bait蛋白質(zhì)的融合蛋白質(zhì)。融合蛋白質(zhì)在A(yíng)DH1啟動(dòng)子下高水平表達，同時(shí)融合蛋白質(zhì)含有一個(gè)c-Myc表位標簽。為了促進(jìn)體外轉錄和翻譯，在pGBKT7的GAL4 DNA-BD和表位標簽之間添加了T7啟動(dòng)子 。
· pGADT7 ——酵母雙雜交 Prey 載體
pGADT7是酵母雙雜交表達載體，旨在表達GAL4激活結構域（AD, 768-881 aa）與目的蛋白質(zhì)的融合蛋白質(zhì)。融合蛋白質(zhì)在全長(cháng)ADH1啟動(dòng)子下高水平表達，同時(shí)融合蛋白質(zhì)含有一個(gè)血凝素（HA）表位標簽。為了促進(jìn)體外轉錄和翻譯，在pGADT7的GAL4 AD和表位標簽之間添加了T7啟動(dòng)子（1,2）。
· pBridge ——三雜交bait載體
pBridge載體與基于GAL4的雙雜交系統組合，可以用于研究三個(gè)蛋白質(zhì)之間的相互作用。在Matchmaker Gold系統中，pBridge相當于替代了pGBKT7。由于它的兩個(gè)不同的多克隆位點(diǎn)，pBridge載體可以表達一個(gè)DNA-BD融合蛋白質(zhì)和另一個(gè)在bait和prey之間起“Bridge”作用的蛋白質(zhì)。
與標準雙雜交分析相比，三雜交系統更有可能用于研究更加復雜的蛋白質(zhì)之間的互作。系統中的第三個(gè)蛋白質(zhì)可以通過(guò)多種方式參與互作：
1. 作為橋梁，連接兩個(gè)原本沒(méi)有直接互作的蛋白質(zhì)，使它們發(fā)生互作。
2. 穩定兩個(gè)蛋白質(zhì)之間的弱相互作用。
3. 修飾或抑制一個(gè)或兩個(gè)蛋白質(zhì)（3）。
4. 抑制雙雜交互作。
額外蛋白質(zhì)的表達受甲硫氨酸誘導型啟動(dòng)子調控——甲硫氨酸不存在的條件下蛋白質(zhì)才能夠表達。蛋白質(zhì)的表達與否由外源培養基中是否含有甲硫氨酸決定，而第三個(gè)蛋白質(zhì)的表達效應則由報告基因或營(yíng)養標記基因的表達來(lái)指示。我們提供的酵母培養基（Code. No：630430 &630429）缺少甲硫氨酸，非常適用于攜帶pBridge載體的酵母菌株。
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■ 制品特點(diǎn)
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1. 非常受歡迎并被廣泛使用的酵母雙雜交載體。
2. pGBKT7和pGADT7是Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System的組分。
3. pBridge表達雙雜交之外的第三個(gè)蛋白質(zhì)。
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■ 制品用途
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1. 酵母雙雜交篩選
2. 酵母三雜交篩選
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■ 文獻
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1. Tirode, F. et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:22995–22999.
2. Brachmann, R. & Boeke, J. (1997) Curr. Opin. Biotechnol. 8:561–568.
3. Osborne, M. et al. (1995) Biotechnology 13:1474–1478.
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