本制品是采用TB Green嵌合熒光法進(jìn)行One Step Real Time RT-PCR反應的專(zhuān)用試劑。使用本制品進(jìn)行Real Time RT-PCR反應可在同一反應管內連續進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單，并能有效防止污染。本反應體系由于可以對擴增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測，大大提高了檢測靈敏度，并省略了PCR反應后的電泳步驟，非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測。
使制品中使用了一種新的反轉錄酶PrimeScript PLUS RTase，具有很強的鏈置換活性，且在短時(shí)間內有效合成cDNA；和高效的熱啟動(dòng)PCR酶TaKaRa Ex Taq® HS組合，能進(jìn)行高靈敏度和高效率檢出。另外，本制品使用了含抗Taq抗體的TaKaRa Ex Taq HS熱啟動(dòng)PCR酶和適合Real Time PCR的Buffer大大地提高了反應的特異性。本制品中的這些酶結合Takara Bio RT-PCR技術(shù)，可更有效地擴增RT-PCR產(chǎn)物。
|
|
|
|
■ 保存
|
-20℃。
|
|
2 × One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 請于-20℃避光保存。
|
|
|
|
■ 試劑盒特長(cháng)
|
1. 進(jìn)行Real Time One Step RT-PCR反應，可以快速、準確地對RNA病毒等微量RNA 進(jìn)行分析。
2. 新的反轉錄酶PrimeScript PLUS RTase和TaKaRa Ex Taq HS組合，能進(jìn)行高靈敏度和高效率檢出；含抗Taq抗體的TaKaRa Ex Taq HS熱啟動(dòng)PCR酶，能有效抑制非特異性擴增，大大提高了反應的特異性。
3. 在2×濃度的Premix中，預先混有TB Green，PCR反應液配制時(shí)，操作簡(jiǎn)單方便。
|
|
|
|
|
|
■ 注意事項
|
1. 當同時(shí)需要進(jìn)行數次Real Time One Step RT-PCR反應時(shí)，應先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、各種酶等)，然后再分裝到每個(gè)反應管中。這樣，可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗操作或實(shí)驗樣品之間產(chǎn)生的誤差。
2. 使用PrimeScript PLUS RTase和TaKaRa Ex Taq HS 時(shí)，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應慢慢吸取。
3. 2 × One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 融解后如有不溶物請充分混合，使用Vortex 等振蕩完全溶解后使用。
4. 反應液的配制、分裝請一定使用新的 (無(wú)污染的) 槍頭、Microtube等，盡量避免污染。
5. 制品只能使用基因特異性反轉錄引物，不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等進(jìn)行反轉錄反應。
|
