本制品是采用TB Green嵌合熒光法進(jìn)行One Step RT-PCR反應的專(zhuān)用試劑。使用本制品進(jìn)行Real Time RT-PCR反應可在同一反應管內連續進(jìn)行，操作簡(jiǎn)單，并能有效防止污染。本反應體系由于可以對擴增產(chǎn)物進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測，大大提高了檢測靈敏度，并省略了PCR反應后的電泳步驟，非常適合于RNA病毒等微量RNA的檢測。
制品中使用了適合于Real Time RT-PCR的反轉錄酶PrimeScript RTase和高效的PCR熱啟動(dòng)酶TaKaRa Ex Taq® HS，具有高擴增效率和高擴增特異性，能進(jìn)行穩定的Real Time One Step RT-PCR反應。本制品的Buffer經(jīng)過(guò)改良，使反應的特異性比使用One Step TB Green PrimeScript RT-PCR Kit（Perfect Real Time）（Code No. RR066A）更高。另外，反應使用的所有酶都配制成了Enzyme Mix的形式，使操作更加方便簡(jiǎn)單。
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■ 保存
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-20℃。
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2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 請于-20℃避光保存。
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■ 試劑盒特長(cháng)
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1. 進(jìn)行Real Time One Step RT-PCR反應，可以快速、準確地對RNA病毒等微量RNA 進(jìn)行分析。
2. PCR反應使用了高效的TaKaRa Ex Taq HS，可以進(jìn)行Hot Start法PCR反應，再與Takara公司特別開(kāi)發(fā)的Buffer系統相結合，具有高擴增效率，高擴增靈敏度之特點(diǎn)。2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4中預先混有TB Green等，反應用酶也配制成了Mix的形式，使反應液配制更加簡(jiǎn)單方便。
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■ 注意事項
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1. 當同時(shí)需要進(jìn)行數次Real Time One Step RT-PCR反應時(shí)，應先配制各種試劑的混合液，然后再分裝到每個(gè)反應管中。這樣，可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗操作或實(shí)驗樣品之間產(chǎn)生的誤差。
2. 使用PrimeScript 1 Step Enzyme Mix 2時(shí)，應輕輕混勻，避免起泡；分取之前要小心地離心收集到反應管底部；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應慢慢吸取。-20℃保存，使用后立即放回冰箱。
3. 2×One Step TB Green RT-PCR Buffer 4 融解后如有不溶物請充分混合，使用Vortex 等振蕩完全溶解后使用。
4. 反應液的配制、分裝請一定使用新的 (無(wú)污染的) 槍頭、Microtube等，盡量避免污染。
5. 制品只能使用基因特異性反轉錄引物，不能使用Random Primer 和Oligo dT Primer 等進(jìn)行反轉錄反應。
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