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本制品是Real Time RT-PCR用的理想反轉錄反應試劑。使用具有較強延伸能力的PrimeScript RTase可以在較短時(shí)間內高效合成Real Time PCR用cDNA。操作簡(jiǎn)單，適合進(jìn)行高通量分析。進(jìn)行2 Step Real Time RT-PCR反應時(shí)，與SYBR® Premix Ex Taq? II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B) 、SYBR Fast qPCR Mix (Code No. RR430S/A/B) ， SYBR Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420Q/A/B) 、 或Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 試劑配合使用，能進(jìn)行高性能的基因表達分析。 本制品提供了SYBR Green分析法和探針?lè )治龇ǜ髯赃m合的反應體系，可以根據分析方法選擇體系。
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■ 保存
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-20℃。
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■ 試劑盒特長(cháng)
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1. 可以快速、高效合成Real Time PCR用cDNA，是進(jìn)行2 Step Real Time RT-PCR反應的理想試劑。
2. 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers兩種反轉錄引物，可根據實(shí)際情況區別使用。反轉錄反應可以使用Random 6 mers或Oligo dT Primer，也可以Oligo dT Primer和Random 6 mers同時(shí)使用。只擴增一種目的基因時(shí)，也可以使用Specific Primer作為反轉錄引物。
3. 本制品提供了SYBR Green qPCR分析法和探針qPCR分析法各自適合的反應體系，可以根據分析方法選擇體系。
注意：以下是SYBR Green qPCR分析法和探針qPCR分析法進(jìn)行反轉錄實(shí)驗的區別
① 用于反轉錄實(shí)驗RT Primer Mix添加量。
② 用于反轉錄實(shí)驗total RNA的添加量。
4. Real Time RT PCR定量需要建立標準曲線(xiàn)，建立標準曲線(xiàn)的條件就是需要將總RNA和反轉錄cDNA稀釋到較低的濃度。如果用水或TE Buffer稀釋時(shí)，由于模板濃度低不穩定，因而會(huì )縮小曲線(xiàn)范圍，結果精度降低。本制品中附加了標準曲線(xiàn)制作用稀釋液EASY Dilution (for Real Time PCR)，將Total RNA或cDNA稀釋至低濃度時(shí)也能夠進(jìn)行準確稀釋?zhuān)菀自趯拸V范圍內獲得準確定量的標準曲線(xiàn)。
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■ 使用注意
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1. 當同時(shí)需要進(jìn)行數次反應時(shí)，應先配制各種試劑的混合液 (Master Mix；其中包括RNase Free dH2O、Buffer、酶等)，然后再分裝到每個(gè)反應管中。這樣可使所取的試劑體積更準確，減少試劑損失，避免重復分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗操作或實(shí)驗之間產(chǎn)生的誤差。
2. 用PrimeScript RT Enzyme Mix I 時(shí)使用前要小心地離心收集到反應管底部。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取時(shí)應慢慢吸取。同時(shí)，要使用精確、量程適合的移液槍?zhuān)⑶也灰筎ip插入液面過(guò)深，否則會(huì )因Tip壁粘著(zhù)造成損失。
3. 分裝試劑時(shí)務(wù)必使用新的槍頭 (Tip)，以防止樣品間污染。
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